光学显微镜作为精密光学仪器，其操作规范性直接影响成像质量、设备寿命及用户安全。本文结合显微镜的工作原理与实验室管理标准，系统梳理日常操作的核心规范，涵盖使用前准备、操作流程、维护保养及安全注意事项四大模块。
一、使用前准备：奠定规范操作基础
环境检查
温湿度控制：确保室温20±2℃、湿度<60%，避免光学部件霉变或机械部件热胀冷缩。
防震隔离：将显微镜置于专用防震台或橡胶减震垫上，隔离外部振动（如人员走动、设备运行）。
清洁度要求：操作区域空气洁净度应达ISO 14644-1标准Class 7（≥0.5μm颗粒物≤352000个/m³），减少灰尘沉积。
设备状态确认
外观检查：
目镜、物镜镜片无划痕、指纹或污渍（必要时用长纤维棉签蘸取无水乙醇轻擦）。
载物台、调焦机构无异物卡滞，光源亮度可调（LED光源需预热10分钟稳定）。
功能测试：
开启电源，验证光源、电动调焦（如配备）、荧光模块（如配备）等功能正常。
检查物镜转换器旋转灵活性，确保物镜切换无卡顿。
样本制备
盖玻片使用：液态样本（如细胞悬液）B须使用盖玻片（厚度0.17mm），避免物镜直接接触液体。
样本固定：使用专用夹具固定载玻片，防止观察过程中滑动。
二、操作流程规范：从开机到关机的标准化步骤
开机与初始化
顺序操作：先开显微镜主机电源，再启动图像采集系统（如相机、软件）。
光源校准：
透射光显微镜：调整聚光镜高度至物镜后焦平面（可通过贝朗特实验验证）。
荧光显微镜：预热汞灯/氙灯15分钟，确保光输出稳定。
调焦与观察
低倍物镜起手：先用4×或10×物镜对光，避免高倍物镜直接接触样本。
粗调焦限制：旋转粗准焦螺旋时，需时刻观察物镜与样本间距，防止碰撞（建议保留≥1mm安全距离）。
细调焦优化：切换至高倍物镜后，仅使用细准焦螺旋调焦，避免粗调焦引发样本漂移。
图像采集与存储
参数设置：
曝光时间：根据样本亮度调整（通常10-500ms），避免过曝或欠曝。
白平衡：使用标准白卡校准，确保颜色还原准确。
数据管理：
图像文件命名遵循“日期_样本名_物镜倍数”格式（如20250618_HeLa_40X）。
定期备份数据至专用服务器，避免本地存储丢失。
关机与整理
光源关闭：先关显微镜主机电源，再拔掉电源插头（荧光显微镜需待汞灯冷却30分钟后再关）。
物镜归位：将物镜转至“八”字位置，防止灰尘落入镜筒。
防尘覆盖：套上专用防尘罩，避免空气中的颗粒物沉积。
三、维护保养规范：延长设备寿命的关键措施
日维护
清洁：
用洗耳球吹除物镜、目镜表面灰尘（禁用嘴吹，防止唾液腐蚀镜片）。
清洁载物台、调焦机构，去除残留样本或污渍。
功能检查：验证调焦、光源、物镜转换等功能正常。
周维护
光路校准：
使用激光校准仪检查光路准直性（误差应<0.1mrad）。
调整聚光镜数值孔径匹配物镜（如100×物镜需NA≥1.4）。
润滑保养：对调焦机构、载物台导轨涂抹显微镜专用润滑脂。
年维护
专业检修：
更换老化光源（LED光源寿命通常>20000小时，汞灯<300小时）。
检测物镜分辨率（使用星点板验证，MTF>0.4为合格）。
性能验证：
通过标准样片（如USAF 1951分辨率板）校准系统分辨率。
测试图像采集系统的线性度（相关系数R²>0.99为合格）。
四、安全注意事项：规避操作风险的核心原则
电气安全
接地保护：确保显微镜电源插头可靠接地，防止漏电风险。
电源适配：使用设备原装电源适配器，避免电压不稳损坏电路。
光学安全
激光防护：使用激光共聚焦显微镜时，B须佩戴激光防护眼镜（波长匹配激光器输出）。
紫外防护：荧光显微镜观察紫外激发样本时，需关闭室内照明，避免紫外光泄漏。
化学安全
样本处理：使用有机溶剂（如二甲苯）清洁样本时，需在通风橱内操作。
废液处置：染色废液需按实验室规定收集，避免随意倾倒污染环境。
五、操作人员资质与培训
资质要求
理论考核：通过显微镜原理、光路结构、安全规范等理论考试（≥80分合格）。
实操认证：完成样本制备、调焦观察、图像采集等实操考核（由Z深工程师评估）。
持续培训
新技术培训：每年参加至少1次显微镜新技术培训（如超分辨技术、AI图像分析）。
安全演练：每半年参与1次实验室安全演练（如化学泄漏、设备故障应急处理）。
